Клинико диагностическое значение холестерина

Общий холестерин и его фракции

Клинико диагностическое значение холестерина

Холестерин — одноатомный спирт, в молекуле которого имеется ядро циклопентанпергидрофенатрена.

Он является компонентом клеточных мембран, предшественником при синтезе желчных кислот, стероидных гормонов (глюкокортикоидов, альдостерона, половых гормонов), витамина D, обнаруживается во всех тканях и жидкостях организма как в свободном состоянии, так и в виде эфиров с жирными кислотами, преимущественно с линолевой (около 10% всего холестерина). Синтез холестерина происходит во всех клетках организма. Основными транспортными формами в крови являются α‑, β‑ и преβ‑липопротеины (или, соответственно, липопротеины высокой, низкой и очень низкой плотности). В плазме крови холестерин находится главным образом в форме сложных эфиров (60‑70%). Эфиры образуются либо в клетках в реакции катализируемой ацил-КоA-холестерин-ацилтрансферазой, использующей в качестве субстрата ацил‑КоA, либо в плазме в результате работы фермента лецитин-холестерин-ацилтрансферазы, осуществляющей перенос жирной кислоты со второго атома углерода фосфатидилхолина на гидроксильную группу холестерина. В плазме крови главными источниками холестерина и фосфатидилхолина для реакции служат липопротеины высокой и низкой плотности, этим путем образуется большая часть эфиров холестерина плазмы.

Для определения содержания холестерина в крови используют следующие методы:

  1. Титрометрические.
  2. Гравиметрические.
  3. Нефелометрические.
  4. Тонкослойная и газожидкостная хроматография.
  5. Полярографические методы, позволяют определять общий и свободный холестерин в присутствии ферментов холестеролоксидаз и холестеролэстераз.
  6. Флюориметрия по реакции с о‑фталевым альдегидом и другими реактивами.
  7. Ферментативные методы — определение протекает в одной пробирке, но в несколько этапов: ферментативный гидролиз эфиров холестерина, окисление холестерина кислородом воздуха с образованием холест‑4‑ен‑3‑ола и перекиси водорода. В качестве ферментов применяются холестеролоксидаза, холестеролэстераза, пероксидаза, каталаза. Ход реакции можно регистрировать:
  • спектрофотометрически по накоплению холестенола.
  • по убыли кислорода в среде.
  • по изменению окраски раствора, в качестве хромогенов — индикаторов протекания реакций — используются 4‑гидроксибензоат, 4‑аминофеназон, 4‑аминоантипирин.

Все эти методы весьма специфичны и хорошо воспроизводимы.

  1. Колориметрические методы, в основе которых лежат следующие цветные реакции:
  • реакция Биоля‑Крофта с использованием персульфата калия, уксусной и серной кислоты и с появлением красного окрашивания.
  • реакция Ригли, базирующаяся на взаимодействии холестерина с реактивом, в составе которого имеются метанол и серная кислота.
  • реакция Чугаева, в которой появляется красное окрашивание после реакции холестерина с ацетилхлоридом и хлористым цинком.
  • реакция Либермана‑Бурхарда, при которой холестерин окисляется в сильно кислой абсолютно безводной среде с образованием сопряженных двойных связей. В результате образуется соединение холестагексаена с концентрированной серной кислотой изумрудно‑зеленого цвета с максимумом абсорбции при 410 и 610 нм. Особенностью этой реакции является отсутствие стабильности окрашивания. В литературе можно встретить разное соотношение ингредиентов в реактиве Либерман-Бурхарда: чем выше содержание уксусного ангидрида, тем с большей скоростью протекает реакция. Протеканию реакции способствуют сульфосалициловая, паратолуенсульфоновая, диметилбензол‑сульфоновая кислоты. С эфирами холестерина реакция идет медленнее, чем со свободным холестерином, скорость возрастает при повышении температуры, свет оказывает разрушающее воздействие на продукты реакции. Все методы, основанные на реакции Либерман-Бурхарда, подразделяются на прямые и непрямые:
◊ к непрямым относятся методы Энгельгарда‑Смирновой, Раппопорта‑Энгельберга, Абеля и заключаются в предварительной экстракции холестерина из сыворотки с последующим определением его концентрации. Из этой группы методов наиболее известен метод Абеля с экстракцией свободного и этерифицированного холестерина изопропанолом или петролейным эфиром, гидролизом эфиров холестерина и последующей реакцией Либерман-Бурхарда. Методы этой группы более воспроизводимы и специфичны;
◊ в прямых методах (Илька, Мрскоса‑Товарека, Златкис‑Зака) холестерин предварительно не экстрагируется, а цветная реакция осуществляется непосредственно с сывороткой. Выявлено, что определение концентрации холестерина по Ильку при сравнении с методом Абеля дает более высокие (по разным авторам на 6%, на 10‑15%) значения, что необходимо учитывать при типировании гиперлипопротеинемий.
  • реакция Калиани‑Златкиса‑Зака, заключающаяся в появлении красно‑фиолетового окрашивания раствора при окислении холестерина хлорным железом в уксусной и концентрированной серной кислотах. Эта реакция в 4‑5 раз чувствительнее, чем реакция Либерман‑Бурхарда, но менее специфична.

Унифицированными методами являются колориметрические методы Илька и Калиани-Златкис-Зака.

Принцип

Основан на реакции Либерман‑Бурхарда: в сильно кислой среде в присутствии уксусного ангидрида происходит дегидратация холестерина с образованием окрашенного в зеленовато‑синий цвет бисхолестадиенилмоносульфоновой кислоты.

Нормальные величины

Сыворотка (указанный метод) 0 ‑ 1 год1.81‑4.53 ммоль/л
до 20 лет

Источник: https://biokhimija.ru/lipidny-obmen/cholesterin.html

5. Количественное определение холестерина в сыворотке крови

Клинико диагностическое значение холестерина

Количественноеопределение холестерина в сывороткекрови по методу Илька.

Принципметода.Холестерин, содержащийся в сывороткекрови, обрабатывается реактивомЛибермана-Бурхарда (смесь уксусногоангидрида, ледяной уксусной кислоты иконцентрированной Н2SО4). При этомхолестерин теряет воду и превращаетсяв непредельный углеводород, который суксусным ангидридом образует зеленоеокрашивание. Интенсивность полученнойокраски определяется на ФЭКе.

Ходработы.В сухую (!) пробирку поместить 2,1 млреактива Либермана-Бурхарда и осторожнопо стенке пробирки добавить 0,1 млнегемолизированной сыворотки крови.

Пробирку тотчас же встряхнуть энергичнымидвижениями 8-10 раз и поместить в термостатпри температуре 30Сна 20-25 минут в темноте.

Полученную зеленуюокраску колориметрировать на ФЭКе прикрасном светофильтре против дистиллированнойводы в кюветах с толщиной слоя 5 мм.

Понайденной экстинкции определитьколичество холестерина в г/л по стандартнойкривой.

Клинико-диагностическоезначение определения холестерина всыворотке (плазме) крови. холестерина в сыворотке крови у человеказависит от возраста.

В сыворотке кровиздорового взрослого человека содержится1,5-2,4 г/л (3,63-5,2 ммоль/л) холестерина, удетей – 1,0-1,3 г/л, юношей – 1,3-1,8 г/л, у людейпожилого возраста выше 2,4 г/л. У мужчинстарше 60 лет содержание холестерина всыворотке крови несколько ниже, чем умужчин 50-60 лет.

Это связано с уменьшениемпродукции и секреции в кровь половыхгормонов. холестерина сыворотке крови женщин детородноговозраста ниже, чем у мужчин; после 60 летполовые различия в уровне этого показателяисчезают.

Уровенькрови холестерина отражает состояниелипидного обмена. Обмен холестериначасто нарушается при различныхзаболеваниях.

Гиперхолестеринемия(повышение содержания холестерина вкрови) отмечается при атеросклерозе,гипертонической болезни, ишемическойболезни сердца, дислипопротеинемиях,сахарном диабете, гипотиреозе, подагре,хроническом алкоголизме, заболеванияхпечени, почек и др. Гиперхолестеринемия– наиболее документированный факторриска коронарного атеросклероза.

Гипохолестеринемия(снижение содержания холестерина вкрови) возникает при гипертиреозе,голодании, синдроме мальабсорбции,поражении центральной нервной системы,хронических обструктивных заболеванияхлегких, острой стадии воспалительногопроцесса, дефиците альфа-липопротеинов(болезнь Танжера), онкологическихзаболеваниях.6.Количественное определение лецитинав сыворотке крови.

Количественноеопределение содержания лецитина всыворотке крови.

Принципметода.Лецитин извлекается из сыворотки кровигорячим спиртом; после минерализациив экстракте колориметрическим методом определяется неорганический фосфор,содержащийся в составе лецитинов.Количество лецитина определяется постандартной кривой.

Ходработы.В пробирку налить 1 мл сыворотки кровии 2,5 мл спирта. Содержимое пробиркиперемешать стеклянной палочкой. Пробиркунеплотно закрыть резиновой пробкой ипоместить на 10 минут в водяную баню притемпературе 80С.

Параллельно поставить контрольнуюпробу с 2,5 мл смеси Блюра. Содержимоеобеих пробирок охладить, профильтроватьчерез обезжиренный фильтр в сухиепробирки.

Для полноты извлечениясодержимое пробирки сполоснуть 1-1,5 млсмеси Блюра и вылить на фильтр.

Полученныефильтраты (опыт и контроль) осторожновыпарить, добавить в каждую пробиркупо 5 капель концентрированной сернойкислоты и сжечь на слабом пламениспиртовки до появления бурой окраскии тяжелых белых паров.

Пробирки охладитьна воздухе, добавить по 5-6 капельпергидроля и содержимое пробирок вновьсжечь до обесцвечивания жидкости.

Послеохлаждения в каждую пробирку добавитьпо 2 мл бидистиллированной воды,нейтрализовать содержимое пробирок6-7 каплями 33% раствора едкого натра,после чего добавить по 2,5 мл ацетатногобуфера (рН – 4,0), 0,5 мл 2% растворамолибденовокислого аммония и 1 мл 1% раствора аскорбиновой кислоты. Содержимоепробирок тщательно перемешать и через10 минут колориметрировать на ФЭКе скрасным светофильтром (опыт противконтроля). лецитина в сывороткекрови в г/л рассчитать по калибровочномуграфику.

Клинико-диагностическоезначение определение содержания лецитинав сыворотке крови. лецитина в сыворотке крови здоровогочеловека зависит от возраста, составляяв среднем 1,5-2,7 г/л. Изменение содержаниялецитина в крови наблюдается при рядезаболеваний (атеросклероз, сахарныйдиабет, микседема и др.).7.Определение протеолитичсской активностиаланинаминотрансферазы.

Источник: https://studfile.net/preview/3883529/page:14/

ТерапевтОнлайн
Добавить комментарий